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一、巨細胞病毒試劑盒用途及檢測方法簡述

巨細胞病毒(CMV)是一種皰疹病毒。是引起先天性變態(tài)反應(yīng)性疾病和接受大量輸血及免疫抑制療法患者中并發(fā)癥的zui主要的生物學因子。約有一半的孕婦初期感染后就把此病傳給胎兒。當胎兒在子宮內(nèi)感染后，可引起智力發(fā)育遲緩、致盲或致聾。

把純化了巨細胞病毒抗原包被在微孔表面。加入經(jīng)稀釋的患者血清樣品。若其中存在CMV IgM抗體，它與包被的抗原結(jié)合成為抗原-抗體復合物，用水洗去未結(jié)合物后加入底物和顯色劑，所產(chǎn)生顏色的強度與樣品中的抗體的量成正比。其結(jié)果通過酶標儀在平行檢測中與臨界校正液和對照品相比較而得出。

二、巨細胞病毒試劑盒試劑盒的組成

1．抗原包被的微孔板：96孔，1塊

2．酶聯(lián)試劑：12mL，1瓶，(紅色液體)

3．樣品稀釋液：22mL，1瓶，(藍色液體)

4．陰性對照：150μL，1瓶，(無色蓋)

5．臨界校正液：150μL，1瓶，(黃色蓋)

    CMV IgM指數(shù)=1.0

6．陽性對照：150μL，l瓶，(紅色蓋)

7．洗滌濃縮液(20X)：50mL，1瓶

8，TMB試劑(一步)：11mL，1瓶

9．終止液 (1N HCL) ：11ml,，1瓶

三、巨細胞病毒試劑盒的保存和儀器

1．試劑盒在2-8℃下保存。

2．微孔板保存在有干燥劑的密封袋中。

3．試劑盒在有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

4．試劑盒中的試劑在保存或使用期間，應(yīng)避免暴露在熱、陽光和強烈光線之中。

*警示與注意

1．試劑盒的某些材料中可能含有潛在生物危險的組分，應(yīng)按微生物學和生物醫(yī)學實驗室有關(guān)生物安全的規(guī)定進行操作和處理。

2．本劑盒僅適用于實驗室。

3．勿用嘴吸移液管；禁止在樣品和試劑盒試劑操作區(qū)吸煙、吃東西。

4．本試劑盒中的各組分是一個完整的單位，不同 批號的試劑盒中的組分不能混用。

5．本試劑盒試劑中含有防腐劑*。*會與鉛、銅形成爆炸性的金屬化合物。

   處理：用大量水沖洗。

四、巨細胞病毒試劑盒樣品的采集和制備

1．采集血樣并分離血清。

2．采集的樣品在2-8℃下可保存7天。冰凍狀態(tài)下可保存6個月。血清樣品要避免反復凍融。

五、巨細胞病毒試劑盒試劑的準備

1．使用前使全部樣品和試劑達到室溫(18-25℃，下同)。   

2．制備洗滌緩沖液：按1：19的比例稀釋洗滌濃縮液(20X)，即50mL洗滌濃縮液用蒸餾水或去離子水稀釋至l升。已稀釋的洗滌緩沖液在2-8℃下可穩(wěn)定一個月，用前混合好。

六、巨細胞病毒試劑盒檢測步驟

1．從酶標板上拆下所需數(shù)量的板條，并固定在支架上。

2．按1：40稀釋待測樣品、陰性對照、陽性對照和臨界校正液。方法是將5μL上述樣品分別加入到200μL樣品稀釋液中，充分混勻。

3．取100μL稀釋的血清樣品、臨界校正液或?qū)φ掌芳尤氲较鄳?yīng)的微孔中。并取100μL樣品稀釋液加入到1A位置的微孔內(nèi)，作為空白對照。輕拍微孔架，去除液體中的氣泡并充分混勻。37℃下溫育30分鐘。

4．把全部微孔中的液體清除干凈后，用稀釋的洗滌緩沖液沖洗5次。

5．向每個微孔中加入100μL酶聯(lián)試劑，輕輕混合10秒鐘，37℃溫育30分鐘。   

6．甩干每個微孔中的酶聯(lián)試劑，然后用稀釋的洗滌緩沖液沖洗5次。

7．向每個微孔中加入100μL TMB試劑，輕輕混合

10秒鐘后，37℃溫育15分鐘。

注意：如無酶標儀，可在第七步加入TMB試劑，37℃溫育15分鐘后，觀察顏色變化。對比患者樣品的顯色與臨界校正液的顯色深淺進行判斷。

8．向上述微孔中加入100μL終止液(1NHCL)終止反應(yīng)，輕輕混合30秒鐘。此步對確保全部藍色*轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色十分重要。

9．用酶標儀在450nm處于15分鐘內(nèi)讀出每個微孔中液體的O.D.值